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ELISA法检测时显色淡,灵敏度偏低及重复性差的原因和解决方法

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酶联免疫吸附实验(ELISA) 即将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面,使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行的技术。该技术可用于检测大分子抗原和特异性抗体等,具有快速、灵敏、简便、载体易于标准化等优点。


问题:显色淡,灵敏度偏低

原因1:底物作用时间不足

解决方法:将时间延长到标准时间。

原因2:样品使用了叠氮?#21697;?#33104;,使酶的活性受到抑制

解决方法:不可以使用NaN3对和酶一起加入的样样?#26041;?#34892;防腐。

原因3:蒸馏水受到污染

解决方法:将受到污染的蒸馏水换成合格的去离子水和蒸馏水。


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原因4:没有配置稀释比例合适的洗涤液,稀释的倍数高于1:20

解决方法:配置稀释比例合适的洗涤液。

原因5:试剂盒的运输时间过长,受到高温的影响

解决方法:在夏天长途运输的时候,将时间缩短,采取降低温度的方法。

原因6:试剂盒失效

解决方法:失效了的试剂不要使用。

原因7:试剂盒没?#24615;?#23460;温下平衡

解决方法:在实验前,将检测试剂盒放置在室温下平衡至少半小时。

原因8:水浴箱温度没有达到37摄氏度

解决方法:将水浴箱的温度调节到37摄氏度,孵育的时候应当尽?#21487;?#24320;门。

原因9:孵育时间不足

解决方法:将定时?#26377;?#20934;,使定时准确。

原因10:加入样品的数量偏少。

解决方法:将吸液器校准,紧密结合吸嘴和移液器,吸嘴保证一 次 性使用。

原因11:酶结合物加样量偏少

解决方法:?#21487;?#24212;当垂直滴加,使液滴确保最大。


问题:较差的重复性

原因:

1.孵育时间不同

2.洗涤条件不一致

3.操作人员不一致

4.样品的数量偏多,耗费过长的加样时间

5.加样量不同

解决方法:

对于标本重复进行测定,移液器尽量使用同一个,将吸嘴装紧,应当尽可能保持和上一次相同的条件和人?#20445;?#20174;而使这些原因导致重复性差的可能性得以排除。


2019-07-10 17:23:38 浏览?#38382;?6次
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