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酶免检测抗原的方法

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酶联免疫吸附实验(ELISA) 即将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面,使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行的技术。该技术可用于检测大分子抗原和特异性抗体等,具有快速、灵敏、简便、载体易于标准化等优点。


一、竞争法

主要用来对小分子抗原进行测定,酶标抗原和受检抗原相互竞争来结合固相抗体,所以和固相的酶标抗原结合的量和与受检抗原结合的量成反相关。


操作步骤

1,连接固相载体和特异性抗体,使得固相抗体形成,洗涤。

2.将一定量酶标抗原和受检标本的混合液加入到待测管中,让其和固相抗体反应。如果没有抗原在受检标本中,那么酶标抗原可以顺畅地结合固相抗体。如果有抗原在受检标本中,那么受检标本中的抗原和酶标抗原一样有机会结合固体抗体,将酶标抗原和固体载体结合的机会竞争性地占去一部分,从而减少了酶标抗原和固相载体的结合的量。仅将酶标抗原加入到参考管中,保温后,和固相抗体结合的酶标抗原的量达到最充分,洗涤。


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二、双抗体?#34892;?#27861;

检测抗原最常用的方法,即是双抗体?#34892;?#27861;,对于包含至少2个抗原决定簇的多价抗原的检测很适用。


基本步骤

1.连接特异性抗体和固相载体,使得固相抗体形成,通过洗涤,将没有结合的抗体和杂质去除。

2.将受检标本加入,让其和固相抗体接触反应一?#38382;?#38388;,结合固相载体上的抗体和标本中的抗原,使固相抗原复合物形成,通过洗涤,将其他没有结合的物质去除。

3.将酶标抗体加入,结合酶标抗体和固相免疫复合物上的抗原。将没有结合的酶标抗体彻底洗涤。此刻,固相载体上的酶的量和标本中受检物质的量成正比。

4.将底物加入,底物在?#34892;?#24335;复合物中的酶的催化作用下变成有色产物。该抗原按照颜色反应的程度进行定性定量分析。


三、双位点一步法

在使用双抗体?#34892;?#27861;对抗原进行测定?#20445;?#33509;将抗原分子上两个不同抗原决定簇的单克隆抗体当作酶标抗体和固相抗体,那么在测定的时候能够并酶标抗体的加入和标本抗体的加入两步为一步,双位点一步法不仅使操作得到简化,使反应时间变?#37238;?#30701;,而且更加显著地提高了测定的特异性和敏?#34892;浴?/span>


2019-07-10 17:41:01 浏?#26469;问?2次
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